養(yǎng)細(xì)胞是醫(yī)學(xué)研究生的基本功。我養(yǎng)過骨髓MSC、心肌細(xì)胞、心肌成纖維細(xì)胞、AD293腺病毒包裝細(xì)胞、PA317逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞。養(yǎng)得**多的是MSC。有三個(gè)小經(jīng)驗(yàn)和大家分享一下：

1. 不要燒瓶口。大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關(guān)瓶子，覺得這樣可以避免污染。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑？知道為什么嗎？燒瓶口燒的。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時(shí)候，熾熱的空氣進(jìn)入瓶內(nèi)。塞緊塞子放入冰箱后，空氣變冷，壓力驟降，培養(yǎng)基中的碳酸就會(huì)轉(zhuǎn)化成二氧化碳，釋放出來。培養(yǎng)基中的碳酸少了，當(dāng)然會(huì)變堿。如果不燒瓶口的話，你會(huì)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會(huì)大大減慢。（當(dāng)然多多少少還是會(huì)有一點(diǎn)越用越堿，因?yàn)槭覝剡€是比冰箱內(nèi)的溫度高）

其實(shí)燒瓶口防止污染純粹是心理安慰。不妨試一下把手指在火上晃幾下，你會(huì)發(fā)現(xiàn)根本就不會(huì)燒疼。如果有細(xì)菌的話，這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細(xì)菌，除非把瓶口和塞子燒紅。我在G內(nèi)從來就不燒瓶口。來美G以后發(fā)現(xiàn)這里更徹底，超凈臺(tái)內(nèi)根本就不點(diǎn)酒精燈。

2. 不要頻繁看細(xì)胞。對(duì)于初學(xué)者而言，養(yǎng)細(xì)胞就像養(yǎng)孩子一樣，有空就要去看看。細(xì)胞越是養(yǎng)不好，就越是經(jīng)常去看。實(shí)際上看細(xì)胞對(duì)細(xì)胞的生長沒有任何好處，特別是對(duì)原代細(xì)胞或是免疫磁珠分選后，密度特別低的細(xì)胞。培養(yǎng)基中的生長因子是非常有限的。細(xì)胞好不容易自分泌一點(diǎn)兒促生長的因子在其周圍，形成有利于生長的局部環(huán)境。你跑去看細(xì)胞，培養(yǎng)瓶這么一晃，把因子都給晃散了。經(jīng)?？梢钥吹叫率?*到晚都在看細(xì)胞，細(xì)胞老是長不好。老手細(xì)胞一扔好幾天不管，細(xì)胞瘋長。

3. 不要怕消化。在傳代的時(shí)候，初學(xué)者往往生怕細(xì)胞消化過度，早早地終止消化。細(xì)胞沒下來就使勁吹燈，吹得滿瓶子都是氣泡。在我看來，用力吹打?qū)?xì)胞的損傷比消化更大。我?guī)熜衷谧鲅芷交≡臅r(shí)候，37度消化過夜，細(xì)胞也沒事。我一般是等細(xì)胞完全變圓后才中止消化。細(xì)胞輕輕一晃就能下來。還有，動(dòng)作要輕柔，盡量不要產(chǎn)生氣泡。氣泡在破裂時(shí)的機(jī)械應(yīng)力相當(dāng)大，對(duì)細(xì)胞的傷害也是很大的。
 
 
 
1. 不要燒瓶口？

燒瓶口不僅僅是為了燒掉細(xì)菌，他的意義還有瓶口溫度升高，使瓶子內(nèi)形成向上的氣流，防止細(xì)菌隨空氣流進(jìn)瓶子內(nèi)，還有弄干瓶口（殘留在瓶口附近的培養(yǎng)液容易引起細(xì)菌繁殖-污染）

2. 不要頻繁看細(xì)胞？

我不是很清楚，一般來說，血清里面不是有生長因子嗎？而且，他的影響應(yīng)該大于細(xì)胞自身分泌的因子。

3. 不要怕消化？

這個(gè)和細(xì)胞的類型關(guān)系非常大。很多細(xì)胞非常脆弱，很怕消化的。