全球生物標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)（GBSI）進(jìn)行的在線調(diào)查結(jié)果證實(shí)了許多細(xì)胞科學(xué)家已經(jīng)知道的情況。

超過一半的受訪者--52％ - “從未”對(duì)他們實(shí)驗(yàn)中使用的細(xì)胞系進(jìn)行認(rèn)證或其他與物種相關(guān)的質(zhì)量控制測試。根據(jù)調(diào)查結(jié)果，百分之四十四的人從未進(jìn)行過STR（短串聯(lián)重復(fù)）DNA分析，這是公認(rèn)的認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)。

雖然受訪者更有可能進(jìn)行一些與無菌相關(guān)的微生物污染質(zhì)量控制，特別是目視檢查，但這些措施通常不會(huì)檢測到支原體細(xì)菌感染的細(xì)胞。

微生物污染和其他細(xì)胞類型的細(xì)胞和組織培養(yǎng)污染不僅影響所討論的培養(yǎng)物，而且還影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的整體再現(xiàn)性。

隨著細(xì)胞培養(yǎng)物用于生物研究，疫苗生產(chǎn)和用于個(gè)性化醫(yī)療和新興再生醫(yī)學(xué)應(yīng)用的治療性蛋白質(zhì)的生產(chǎn)的持續(xù)增加，培養(yǎng)物污染仍然是一個(gè)重要的問題。根據(jù)過去十年對(duì)主要細(xì)胞庫的提交，估計(jì)有18％**36％的細(xì)胞系可能被污染或錯(cuò)誤識(shí)別。

例如，在2008年，通過STR分析分析了40個(gè)人甲狀腺癌細(xì)胞系。僅獲得了23種獨(dú)特的特征，并且許多交叉污染細(xì)胞系不是甲狀腺。這些細(xì)胞系先前已在甲狀腺癌研究中使用了二十年。

由于這個(gè)問題的范圍，NIH和許多期刊現(xiàn)在在批準(zhǔn)或接受出版之前建議或要求細(xì)胞系認(rèn)證，這使得科學(xué)家利用細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行研究**關(guān)重要。

避免其他細(xì)胞類型的污染

一般考慮

• 一般保持良好的細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)踐：幫助確保單細(xì)胞類型的維護(hù)在任何時(shí)候只處理生物安全罩中的單個(gè)細(xì)胞系。
• 在將其用于特定細(xì)胞系之間徹底清潔工作區(qū)。
• 將設(shè)備專用于單細(xì)胞系，包括瓶子和細(xì)胞培養(yǎng)基和其他試劑的等分試樣。
• 清楚地標(biāo)記瓶子; 等分試樣也應(yīng)清楚標(biāo)記，并且不得在細(xì)胞系之間共享。
• 定期清空廢物容器并使用有效對(duì)抗微生物和細(xì)胞培養(yǎng)物的消毒劑。

采取具體的預(yù)防措施

• 從信譽(yù)良好的細(xì)胞庫中獲取細(xì)胞系。
• 開發(fā)和維護(hù)主要和工作細(xì)胞庫的受控細(xì)胞庫系統(tǒng)。堅(jiān)持這些慣例有助于避免污染，交叉污染，以及每次連續(xù)傳代培養(yǎng)都會(huì)增加的遺傳和表型不穩(wěn)定性。
• 執(zhí)行認(rèn)證測試，包括STR分析，同工酶分析和污染測試。
• 避免細(xì)胞系轉(zhuǎn)移給同事。如果轉(zhuǎn)移確實(shí)發(fā)生，細(xì)胞應(yīng)附有驗(yàn)證材料完整性的綜合文件。

從信譽(yù)良好的細(xì)胞庫中獲取細(xì)胞系，定期檢查細(xì)胞系的特征，并實(shí)施良好的無菌技術(shù)將有助于避免交叉污染。DNA指紋圖譜，核型分析和同種型分析可以確認(rèn)細(xì)胞培養(yǎng)物中是否存在交叉污染。

連續(xù)監(jiān)測培養(yǎng)細(xì)胞

通過相差顯微鏡定期檢查細(xì)胞系形態(tài)和生長特征并與參考圖像比較可以指示早期問題。這些線索包括在從冷凍儲(chǔ)存中恢復(fù)后很快識(shí)別細(xì)胞系中的意外形態(tài)或生長特征，這可能意味著從儲(chǔ)存中回收錯(cuò)誤的小瓶。包括正確格式的細(xì)胞系名稱的印刷標(biāo)簽必須具有適合于低溫儲(chǔ)存的粘合劑，因?yàn)椴贿m當(dāng)粘附的標(biāo)簽將分離，在庫存中留下未標(biāo)記的小瓶。

美G典型培養(yǎng)物保藏中心（ATCC）開發(fā)了一種人體細(xì)胞系認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)，建議使用STR分析?？梢栽诖蠖鄶?shù)可以執(zhí)行分子技術(shù)的實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行STR分析，從而為人類細(xì)胞系的鑒定提供簡單，低成本和可靠的方法。

需要結(jié)合常規(guī)身份測試和對(duì)良好細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)踐的警惕，以提供有效的細(xì)胞培養(yǎng)并確保研究對(duì)于同行評(píng)審是可接受的。如果不遵守這些指導(dǎo)原則，將導(dǎo)致不良遺產(chǎn)和無效研究。

參考

1. Passim等人。使用未經(jīng)驗(yàn)證的，過度傳遞的細(xì)胞系的成本：我們需要多少數(shù)據(jù)？生物學(xué)技術(shù)。2007年11月; 43（5）：575,577-8,581-2。

愛德華伯內(nèi)特博士，博士。James Cooper，細(xì)胞系交叉污染的檢測和預(yù)防：Biowire 2012春季，19-2.1

3. Shweppe等人：40個(gè)人類甲狀腺癌細(xì)胞系的脫氧核糖核酸分析顯示交叉污染導(dǎo)致細(xì)胞系冗余和錯(cuò)誤識(shí)別。Journal of Clinical Endocrinology＆Metabolism，93卷，第11期，2008年11月1日，第4331-4341頁。

4.大師，JR等。短串聯(lián)重復(fù)分析為人細(xì)胞系提供了G際參考標(biāo)準(zhǔn)。Proc Natl Acid Sci US A. 2001年7月3日; 98（14）：8012-8017。

5. Freedman，LP等。改變細(xì)胞培養(yǎng)文化：應(yīng)用**佳實(shí)踐和認(rèn)證以確保科學(xué)再現(xiàn)性。2015年10月1日.Bio Pharm International Volume 28，Issue 10，pages 14-21。